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免疫學技術ppt下載

素材大小:
1.27 MB
素材授權:
免費下載
素材格式:
.ppt
素材上傳:
lipeier
上傳時間:
2019-06-29 14:27:23
素材編號:
234666
素材類別:
課件PPT
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免疫學技術ppt

這是免疫學技術ppt,包括了抗原或抗體的檢測,抗原抗體反應的規律和特點,抗原抗體的檢測方法,雙向免疫擴散,火箭電泳,補體結合反應,免疫電鏡技術等內容,歡迎點擊下載。

免疫學技術ppt是由紅軟PPT免費下載網推薦的一款課件PPT類型的PowerPoint.

免疫學技術及應用 第一節 抗原或抗體的檢測 抗原和相應抗體,無論在體內或體外相遇,均可發生各種各樣的反應,統稱為抗原抗體反應。 抗原-抗體反應包括沉淀反應、凝集反應、溶解反應、補體結合反應和中和反應等。 抗原-抗體反應可 用已知的特異性抗體檢測未知的抗原;也可用已知的抗原檢測未知的抗體。 免疫熒光技術、免疫酶技術、同位素標記技術、發光免疫分析等免疫標記技術提高了抗原抗體反應的敏感性。 抗原抗體反應的規律和特點 抗原與抗體能夠特異性結合是基于兩種分子間的結構互補性與親和性,這兩種特性是由抗原與抗體分子的一級結構決定的。 1、 特異性 :一種抗原只能和由它刺激產生的抗體相結合,不能跟與它無關的抗體發生反應。這種特性是由抗原的決定簇基于抗體可變的的化學組成、空間立體構型所決定的。 2、 定比性 :抗原一般都是多價的,而抗體( IgG )則是二價的,只有二者比例適合時,抗原抗體才能結合得最充分,形成的抗原抗體復合物最多,反應最明顯,結果出現最快,此稱為等價帶 。 3、可逆性:抗原與抗體的結合雖具有穩定性,但由于二者之間是非共價鍵結合,因此又是可逆的,在一定條件下可解離,且解離后各自生物活性不變。 4、分階段反應 :第一為抗原與抗體發生特異性結合的階段,此階段反應快,僅需幾秒至幾分鐘,但不出現可見反應。第二為可見反應階段,此階段反應慢,往往需要數分鐘至數小時。 5 、敏感性 :不僅可用于定性,還可用于檢測極微量的抗原抗體,其靈敏程度大大超過當前應用的常規化學方法。 抗原抗體的檢測方法 凝集反應 沉淀反應 補體溶血反應 和補體結合反應 中和反應 用標記抗體或抗原進行的抗原抗體反應 凝集反應 (Agglutination) 細菌、紅細胞等顆粒性抗原與相應抗體結合后形成凝集 現象,稱為凝集反應。 1、直接凝集:將細菌或紅細胞與相應的抗體直接反應,出現細菌凝集或紅細胞凝集現象。又分為玻片法和試管法。 2、間接凝集:將可溶性抗原包被在紅細胞或乳膠顆粒表面,與相應抗體反應出現顆粒凝集現象。 沉淀反應 (Precipitation) 血清蛋白質、細胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應抗體結合后出現沉淀物,這一類反應稱為沉淀反應。沉淀反應可在液體中進行,如絮狀沉淀。大多沉淀反應是用半固體瓊脂凝膠為介質,進行瓊脂擴散故也稱免疫擴散。 單向免疫擴散 (Single Immunodiffusion) 是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板,在適當位置打孔后將抗原加入孔中擴散。抗原在擴散過程中與凝膠中的抗體相遇,形成以抗原孔為中心的沉淀環,環的直徑與抗原含量成正比相關。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA 和 C 3等的含量。 雙向免疫擴散 (Double Immunodiffusion) 位于凝膠不同小孔中的抗原和抗體,當兩者相對擴散時,經一定時間后,若兩者相對應,會在瓊脂小孔間、兩者最恰當的比例處形成白色沉淀線。觀察沉淀線的位置、數量、形狀以及對比各沉淀線之間的關系,可對抗原或抗體進行定性分析。 此方法可應用于以下方面: (1)抗原或抗體的純度鑒定。也可對抗體效價進行初步估算。 (2)用已知抗血清(或抗原)檢測未知抗原(或抗體) (3)抗原或抗體相對分子量的估計 雙向瓊脂擴散常見孔型有三孔型、雙孔型、雙排孔型、梅花孔型 雙向免疫擴散 雙向免疫瓊脂擴散孔型 是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中,二者自由向周圍擴散并相遇,在比例合適處形成沉淀線。如果反應體系中含兩種以上的抗原抗體系統,則小孔間可出現兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性 、組成和兩種抗原相關性分析的檢測。 免疫電泳 (Immunoelectrophoresis) 免疫電泳為區帶電泳與雙向免疫擴散的結合。先利用區帶電泳技術將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內分離,然后在與電泳方向平行的方向上開槽,加入抗血清。37℃下使兩者擴散,各區帶蛋白在相應的位置與抗體反應形成弧形沉淀線。 雙向免疫電泳(two dimentional immuno-electrophoresis) 是一種將火箭電泳與血清免疫電泳相結合的方法。先將血清用電泳分離出各成分,然后切下凝膠板轉移至另一已加有抗血清的凝膠上,進入垂直方向的第二次電泳,形成呈連續火箭樣的沉淀線。 免疫標記技術 用熒光素、同位素或酶等示蹤物質 標記抗體(或抗原)進行抗原-抗體反應。標記物質與抗體(或抗原)的化學連接未改變抗體(或抗原)的免疫學特性,同時標記物的性質依然存在,因而極大的提高了反應的靈敏度,可以對微量物質進行定量、定性或定位檢測。免疫標記技術主要有三種基本類型:免疫熒光技術、免疫酶技術和同位素標記技術。 免疫熒光顯微技術 (Immunofluorescence Technique) 是用熒光素(常用的有異硫氰酸熒光素,FITC) 與抗體連接成熒光抗體,再與待測標本的抗原反應,,置熒光顯微鏡下觀察,抗原抗體復合物散發出熒光,借此對標本中的抗原作鑒定和定位。 包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。 直接熒光法:將熒光素直接標記抗體作標本染色。該法的優點是特異性強,但其缺點是每檢測一種抗原必須制備相應的熒光抗體。 間接熒光法:用一抗與標本中的抗原結合,再用熒光素標記的二抗染色。該法的優點是敏感性比直接法高,制備一種熒光素標記的二抗可用于多種抗原的檢測,但非特異性熒光亦會增加。 補體結合免疫熒光法:此法是在間接法的第一步抗原—抗體反應時加入補體,使之與抗原——抗體復合物結合;再用熒光素標記的抗C3抗體進行示蹤。 酶免疫測定 (Enzyme Immunoassay, EIA) 是用酶(常用的有辣根過氧化物酶,HRP和堿性磷酸酶,AP) 標記的抗體進行的抗原抗體反應。EIA將抗原抗體反應的特異性與酶催化作用的高效性相結合,通過酶作用于底物后顯色來判定結果。常用的方法有酶聯免疫吸附試驗和酶免疫組化法,前者測定可溶性抗原或抗體, 后者測定組織中或細胞表面的抗原。 酶聯免疫吸附試驗 (Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA) 是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面,使抗原抗體反應在固相表面進行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法BAS-ELISA等。 ELISA 放射免疫測定法 (Radioimmunoassay, RIA) 是用放射性核素標記抗原進行的免疫學檢測技術。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應的特異性結合,使檢測的敏感性達ng水平。常用于標記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長激素、藥物等微量物質的測定。 RIA法原理及標準曲線 免疫印跡法(Immunoblotting) 是將凝膠電泳與固相免疫測定結合,先把電泳分區的蛋白質轉移到固相載體,再用酶免疫、放射免疫等技術測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質并確定其分子量。常用于檢測多種病毒 如HIV 的抗體或抗原。 免疫電鏡技術(immuno-electron microscopy, IEM) 免疫電鏡技術是一種采用電子致密物質標記的抗體與其相應抗原發生特異性結合后,借電鏡檢出這一標記復合物的技術。 是利用膠體金在堿性環境中帶有負電的性質,使其與抗體相吸附,從而將抗體標記。當用金標記的抗體與抗原反應時,在光鏡水平膠金液呈現鮮艷的櫻紅色,不需加外進行染色。在電鏡水平,金顆粒具有很高的電子密度,清晰可辨。

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